Extração do DNA
Resumo
Esta
atividade prática possibilita a extração de DNA de morango, que também pode ser
substituído por banana ou tomate, utilizando materiais de fácil acesso.
O experimento
Materiais
•
Saco plástico comum transparente;
•
Colher de medida (colher de café);
•
Bastão de vidro ou palito de madeira;
•
Cloreto de sódio (sal de cozinha);
•
Detergente comercial;
•
Béquer ou copo;
•
Gaze para filtrar;
•
Tubo de ensaio;
•
Funil;
•
Faca;
•
Água;
•
Pipeta Pasteur, seringa ou conta-gotas;
•
Proveta ou outro frasco com graduação volumétrica;
•
2 ou 3 morangos (pode ser substituído por ½ banana ou ½ tomate);
•
Álcool etílico absoluto ou álcool etílico doméstico (>90oG.L) (deve ser
mantido
gelado até o momento da sua utilização).
Procedimento
Sugerimos que essa atividade seja realizada como complemento às
aulas teóricas sobre DNA.
Verifique, inicialmente, quais são os conhecimentos dos alunos
sobre o conceito de DNA enquanto molécula responsável pelas características de
todos os seres vivos. Pergunte, por exemplo, quais organismos possuem DNA e
qual é a função que essa substância tem nos seres vivos. Discuta com eles onde
o DNA é encontrado nas células eucarióticas: o DNA é o
próprio cromossomo? Se necessário, relembre os níveis de
organização do material genético (de cromossomos até a dupla hélice do DNA)
para lembrar que o DNA se encontra associado às moléculas de proteínas. Essas
informações serão úteis para que os alunos compreendam melhor cada etapa do
processo de extração do DNA. É importante discutir com os alunos a questão das
dimensões: é possível enxergar células a olho nu? E o seu núcleo? E os
cromossomos? E a dupla hélice? Isso é fundamental para não criar no aluno a
expectativa equivocada de que a atividade permitirá que ele visualize a “dupla
hélice” do DNA. Depois de revisados os principais conceitos, distribua o
roteiro de trabalho e explique qual é o objetivo do experimento e de seu
procedimento.
Protocolo Experimental
Preparo da Solução de “Lise”(ruptura das
membranas celulares)
Misturar
6 mL de detergente, 4g de NaCl (ou seja, aproximadamente 4 colheres de café
cheias de sal de cozinha) e água suficiente para formar 60 mL de solução
Extração do DNA
1) Cortar e macerar os morangos com a solução de lise, no saco
plástico, até se obter uma suspensão liquefeita da polpa do fruto. Este
procedimento facilitará a filtração.
A maceração proporcionará uma primeira quebra das células e
aumento da superfície de contato com a solução de “lise”, cuja função é romper
as membranas celulares e as membranas nucleares ainda intactas, o que liberará
as moléculas de DNA que estavam localizadas no interior do núcleo. As moléculas
de detergente desestruturam os lípideos, principais componentes da membranas,
provocando sua ruptura, e o sal favorece a aglomeração das moléculas de DNA.
2)
Misturar a suspensão durante 2 a 3 minutos e, em seguida, filtrar utilizando a
gaze, o funil e o tubo de ensaio;
3)
Depois de realizar a filtração, acrescentar lentamente o álcool etílico gelado,
com o auxílio de uma pipeta ou conta-gotas, até dobrar o volume inicial da
suspensão
O DNA possui baixa solubilidade em álcool etílico e também sofre
um processo de desidratação, fazendo com que as moléculas fiquem mais
compactadas. Além disso, o DNA também apresenta baixa densidade em relação a
outros componentes celulares. Esses fatores fazem com que ele seja visualizado
como um sobrenadante na solução de álcool etílico, que tem o aspecto de uma
“nuvem”
Fonte:
BIO aulas
Laboratório de tecnologia educacional
Autores: Bianca Caroline Rossi- Rodrigues e Eduardo Galembeck
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